1.

論文（リポジトリ）
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1. ハブ毒のコラゲナーゼに関する研究(農芸化学科)
知念, 功 ; 石松, 亮 ; 福田, 亘博 ; Chinen, Isao ; Ishimatsu, Akira ; Fukuda, Nobuhiro
出版情報: 琉球大学農学部学術報告 — The Science Bulletin of the Faculty of Agriculture. University of the Ryukyus.  pp.43-56,  1980-11-29.  琉球大学農学部
URL: http://hdl.handle.net/20.500.12000/4085
概要: ハブ毒を不溶性コラーゲンに作用し, 生成してくる可溶性ペプタイド中のヒドロキシプロリン含量を定量することにより, ハブ毒コラゲナーゼ活性を求めた。この酵素の至適pHは, 8.0であり, 至適温度は, 60℃であった。この不溶性コラーゲンにこ … の酵素を吸着させ(30℃, 60分反応), 遠心し, 1M食塩溶液で溶出し, 本酵素を精製した。本酵素の吸着率は, 80%であった。また溶出率も80%であった。このコラーゲンと粗毒の添加割合は, 300 : 1の時本酵素の吸着率は, 最大であった。この精製酵素をさらにセファデックスG-75,G-150ゲルカラムクロマトグラフィーにかけ純化した結果, その純化倍率は, 約1.13倍になった。この純化酵素は, ディスクポリアクリルアミドゲル電気泳動的に2個以上のバンドが見られ, またコラゲナーゼ活性以外にカゼイン水解活性も見られた。
Collagenase activity of Habu venom was measured the amount of hydroxyproline of soluble peptide liberated by reaction of the venom and insoluble collagen (60℃, 30 min). The enzyme activity was maximum at pH 8.0 and at 60℃. The purification of the enzyme was carried out by being adsorbed onto insoluble collagen (30℃, 60min), centrifuged, and eluted with 1M sodium cloride solution. Rate of adsorption of the enzyme was maximum, 80% for total activity, when ratio of insoluble collagen to the enzyme was 300 : 1,and the elution also 80% for activity of the enzyme adsorbed. Further purification of the enzyme fraction by Sephadex G-75 and G-150 column chromatography was found to be a 6.5% over all yield and a 1.13 fold increase in specific activity. The purified enzyme revealed two more bands by disc gel electrophoresis and hydrolysed casein.
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2.

論文（リポジトリ）
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2. サキシマハブ毒のアルギニンエステル水解酵素に関する研究(農芸化学科)
知念, 功 ; 大城, ゆみ子 ; 饒平名, とく子 ; 小渡, 恵子 ; 兼村, 憲勝 ; 岩永, 貞昭 ; Chinen, Isao ; Oshiro, Yumiko ; Nohina, Tokuko ; Odo, Keiko ; Kanemura, Norikatsu ; Iwanaga, Sadaaki
出版情報: 琉球大学農学部学術報告 — The Science Bulletin of the Faculty of Agriculture. University of the Ryukyus.  pp.57-68,  1980-11-29.  琉球大学農学部
URL: http://hdl.handle.net/20.500.12000/4086
概要: サキシマハブ毒のタンパク質水解活性を調べた結果, Tos-Arg-OMeHCl, Casein, Insoluble Collagene, Tos-Lys-OMeHCl, Ac-L-Gly-Lys-OMe AcOHに対する水解活性が見られた … 。その内でもTAME活性は, 49.41(x10^<-3>M TAME/mg/min)で高い値であった。このTAME水解酵素は, pH2.5∿11の範で安定であったが, 70℃以上(10分間)に加熱するとその活性は, 急激に減少した。またその酵素の至適温度は, 45℃であった。この蛇毒をセファデックスG-75カラムにのせ精製すると2個の活性ピークが見られ, その内の主要活性ピーク部をさらにセファデックスG-75,DEAEセルロースカラムを用いて精製すると, 最終的にこの分画から3個の活性ピークが見られた。
Sakishima habu venom hydrolyzes Tos-Arg-OMeHCl (49.41 TAME×10^<-3>M/mg/min), casein (13.26 tyrosine μg/mg/min), insoluble collagen (3.26 hypro. μg/mg/min), Tos-Lys-OMeHCl (1.43 TLME×10^<-3>M/mg/min), and Ac-L-Gly-Lys-OMeOH (0.38 AGLE×10^<-3>M/mg/min). The TAME hydrolyzing enzyme is stable in a pH region of 2.5 to 11 and at temperature below 50℃ (10 min); however it becomes unstable over 70℃. The enzyme activity was maxium at 45℃. Sephadex G-75 gel filtration of the venom was found to contain two active peaks, and further purification of the main active fraction by Sephadex G-75 and DEAE cellulose column chromatography was demonstrated to have three active peaks.
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